Laboratorijski testovi za dijagnozu COVID-19 koji su trenutno u praksi prema preporukama međunarodnih stručnih tijela pregledavaju se i ocjenjuju.
COVID-19 bolest, koji potječe iz Wuhana u Kini, do sada je zahvatio više od 208 zemalja. Znanstvena zajednica u cijelom svijetu je u posljednjih nekoliko mjeseci stavljena pred značajan izazov u razvoju dijagnostički testovi za Covid-19 otkrivanje bolesti kako bi se pregledali pacijenti i sumnjivi pojedinci kako bi se učinkovito upravljalo i kontroliralo pandemiju.
Prije nego što procijenimo trenutne metode i prakse koje se koriste za otkrivanje COVID-19, najprije shvatimo što uzrokuje COVID-19 i kako se razvijaju dijagnostički testovi za provjeru pacijenata na ovu bolest. Bolest COVID-19 uzrokovana je pozitivno ulančanom RNA virus koji su zoonoza, što znači da mogu prijeći barijere vrsta od životinja do ljudi, i mogu uzrokovati, kod ljudi, bolesti u rasponu od obične prehlade do težih bolesti kao što su MERS i SARS. Virus koji uzrokuje COVID-19 sada je Međunarodni odbor za taksonomiju virusa (ICTV) nazvao SARS-CoV-2, jer je vrlo sličan onom koji je izazvao izbijanje SARS-a (SARS-CoVs). Dijagnostički test za bolest COVID-19 može se razviti na više načina.
Najpopularnija i trenutno prihvaćena metoda u svijetu je razvoj dijagnostičkog testa koji može otkriti sam virus SARS-CoV-2. Ovaj test temelji se na detekciji virusnog genoma u uzorku pacijenta pomoću RT-real time PCR-a (reverzna transkriptaza-real time Polymerase Chain Reaction). To podrazumijeva pretvorbu virusne RNK u DNA korištenjem enzima zvanog reverzna transkriptaza, a zatim pojačavanje DNK pomoću specifičnog skupa početnica i fluorescentne sonde, koje se vežu na specifično područje na virusnoj DNA, korištenjem Taq polimeraze i otkrivanjem fluorescentnog signala. Ovi se testovi nazivaju NAATs (Testovi amplifikacije nukleinskih kiselina). Ova tehnika može biti vrlo korisna za vrlo rano otkrivanje prisutnosti nukleinske kiseline u uzorku bolesnika, čak i kod asimptomatskih pacijenata koji ne pokazuju simptome bolesti COVID-19 (osobito u razdoblju inkubacije od 14-28 dana) iu kasnijem dijelu kao i kada je bolest u punoj mjeri.
Razne tvrtke diljem svijeta radile su u utrci s vremenom tijekom posljednjih nekoliko mjeseci na razvoju dijagnostičkog testa temeljenog na NAAT-u za otkrivanje SARS-CoV-2 na temelju smjernica CDC-a (Centre for Disease Control), Atlante, SAD-a i WHO-a ( 1, 2). Zdravstvene vlasti diljem svijeta odobravaju ove testove za hitnu upotrebu za otkrivanje SARS-CoV-2. Do sada ciljani virusni geni uključuju N, E, S i RdRP gene, zajedno s odgovarajućim pozitivnim i negativnim kontrolama. Uzorci pacijenata koji se uzimaju za takav test su iz gornjih dišnih puteva (bris nazofaringealnog i orofaringealnog) i/ili donjeg respiratornog trakta (sputum i/ili endotrahealni aspirat ili bronhoalveolarno ispiranje). Međutim, također je moguće otkriti virus u drugim uzorcima, uključujući stolicu i krv. Uzorke je potrebno brzo prikupiti na prikladan način, poduzimajući sve potrebne mjere opreza i pridržavajući se praksi biološke sigurnosti (prema smjernicama koje je utvrdila WHO[1]), od pacijenata koji zadovoljavaju definiciju sumnje na slučaj COVID-19, čuvajući ih i pakirajući dobro, ako je potrebno transportirati u dijagnostički centar, a zatim obraditi (vađenje RNA u biološko-sigurnosnom ormaru u BSL-2 ili ekvivalentnom objektu) na način da se osigura integritet uzorka. Sve se to mora provoditi prioritetno radi boljeg kliničkog upravljanja i kontrole epidemije.
Vrijeme otkrivanja za različite dostupne testove temeljene na NAAT-u koje su razvile velike dijagnostičke tvrtke širom svijeta varira od 45 minuta do 3.5 sata. Učinjena su razna poboljšanja ovih testova kako bi se oni pretvorili u testove za njegu i postigli željene rezultate u što kraćem vremenu bez ugrožavanja točnosti rezultata, kako bi se povećao broj testova koji se mogu obaviti u jednom danu.
Druge opcije dijagnostičkih testova su brzi dijagnostički testovi (RDT) koji otkrivaju virusne antigene/proteine koji se eksprimiraju na površini čestica virusa SARS-CoV-2 dok se repliciraju u stanicama domaćina i uzrokuju bolest ili antitijela domaćina kao odgovor na infekciju; ovaj test otkriva prisutnost antitijela u krvi ljudi za koje se vjeruje da su bili zaraženi COVID-19 (3).
Točnost i reproducibilnost RDT-a za otkrivanje virusnih antigena ovisi o nekoliko čimbenika uključujući vrijeme od početka bolesti, koncentraciju virusa u uzorku, kvalitetu i obradu uzorka te formulaciju reagensa prisutnih u testnim setovima. Zbog ovih varijabli, osjetljivost ovih testova može varirati od 34% do 80%. Glavni nedostatak ove opcije je da virus mora biti u replikativnom i infektivnom stadiju kako bi otkrio virusne proteine.
Slično, testovi za otkrivanje antitijela domaćina temelje se na snazi odgovora protutijela koja ovisi o čimbenicima kao što su dob, status uhranjenosti, ozbiljnost bolesti i određeni lijekovi ili infekcije koje potiskuju imunološki sustav. Glavni nedostatak ove opcije je taj što se antitijela stvaraju nekoliko dana do tjedana nakon infekcije virusom SARS-CoV-2 i potrebno je toliko čekati da se izvrši test. To znači da će dijagnoza infekcije COVID-19 na temelju odgovora antitijela domaćina često biti moguća tek u fazi oporavka, kada su mnoge prilike za kliničku intervenciju ili prevenciju prijenosa bolesti već prošle.
Trenutno su gore spomenuti RDT odobreni samo u istraživačkom okruženju, a ne za kliničku dijagnozu zbog nedostatka podataka (3, 4). Kako sve više i više epidemioloških podataka postaje dostupno za COVID-19, razvijat će se i odobravati sve više RDT-ova kao testova za njegu u kliničkom okruženju jer mogu dati rezultate za 10-30 minuta za razliku od testova temeljenih na NAAT-u koji u prosjeku zahtijevaju nekoliko sati za otkrivanje bolesti.
***
Reference:
1. SZO, 2020. Preporuke za strategiju laboratorijskog testiranja za COVID-19. Privremene smjernice. 21. ožujka 2020. Dostupno online na https://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/331509/WHO-COVID-19-lab_testing-2020.1-eng.pdf Pristupljeno 09. travnja 2020
2. CDC 2020. Informacije za laboratorije. Privremene smjernice za laboratorije dostupne online na adresi https://www.cdc.gov/coronavirus/2019-nCoV/lab/index.html Pristupljeno 09. travnja 2020.
3. SZO, 2020. Savjeti o korištenju testova na mjestu pružanja njege. Znanstveni sažetak. 08. travnja 2020. Dostupno na adresi https://www.who.int/news-room/commentaries/detail/advice-on-the-use-of-point-of-care-immunodiagnostic-tests-for-covid-19 Pristupljeno 09. travnja 2020.
4. ECDC, 2020. Pregled situacije brzog testiranja za dijagnozu COVID-19 u EU/EEA. 01. travnja 2020. Europski centar za prevenciju i kontrolu bolesti. Dostupno online na https://www.ecdc.europa.eu/en/publications-data/overview-rapid-test-situation-covid-19-diagnosis-eueea Pristupljeno 09. travnja 2020
***
