Vrijeme analize znatno je smanjeno s otprilike jednog sata na nekoliko minuta nedavno objavljenom metodom RTF-EXPAR koja koristi pristup bez reverzne transkriptaze (RTF) za konverziju RNK u DNA nakon čega slijedi EXPAR (Exponential Amplification Reaction) za pojačanje na jednoj temperaturi.
Kontroliranje stope Covid-19 Širenje zahtijeva točnu i bržu strategiju testiranja virusa. RT-PCR (lančana reakcija polimeraze reverzne transkriptaze), najtočnija metoda testiranja koja se trenutno koristi je test u dva koraka koji traje oko 60 minuta po uzorku.
Istraživači sa Sveučilišta u Birminghamu izvijestili su o novoj metodi za otkrivanje SARS-CoV-2. To bi moglo omogućiti mnogo brže testiranje i dovoljno je osjetljivo.
Detekcija virusne RNK putem RT-PCR (lančana reakcija polimeraze reverzne transkriptaze) uključuje pretvorbu virusne RNA u komplementarnu DNA (cDNA) nakon čega slijedi amplifikacija cDNA kvantitativnim PCR (qPCR). cDNA se zatim detektira pomoću fluorescentne boje. Ovo traje do sat vremena.
Vrijeme analize znatno je smanjeno s otprilike jednog sata na nekoliko minuta nedavno objavljenom metodom RTF-EXPAR koja koristi pristup bez reverzne transkriptaze (RTF) za pretvorbu RNA u DNA nakon čega slijedi EXPAR (Exponential Amplification Reaction) za pojačanje na jednoj temperaturi. Umnožavanje koje se odvija na jednoj temperaturi je ključ za brzinu, jer se time izbjegavaju dugotrajni koraci zagrijavanja i hlađenja RT-PCR-a. Nadalje, dio DNA koji se umnožava je manji u usporedbi s RT-PCR. Dakle, EXPAR generira do 108 lanaca DNK proizvoda u nekoliko minuta. Stvaranje dupleksa se prati, kao iu RT-PCR metodi, pomoću fluorescentne boje, SYBR Green.
Zanimljivo je da se nova metoda može modificirati za otkrivanje nekoliko drugih zaraznih bolesti uzrokovanih RNA virusima, na primjer Ebola, RSV, itd.
Izvor (i):
Carter i sur. (2020.). Detekcija SARS-CoV-5 RNA ispod 2 minuta pomoću reakcije eksponencijalne amplifikacije bez reverzne transkriptaze, RTF-EXPAR. Prettisak. Objavljeno na medRxiv Objavljeno 04. siječnja 2021. DOI: https://doi.org/10.1101/2020.12.31.20248236
***
